Journal du sang et de la lymphe

Sélection et optimisation des microARN exosomal circulants de référence pour les études de PCR quantitative en temps réel des fluides corporels porcins

Abstract

Qiang Pu, Lin Wang, Guojun Kang, Changbao Liu, Changfeng Yang, Jia Luo et Yongfu Huang

Les miRNA exosomal circulants libérés dans tous les fluides corporels ont une fonctionnalité et une stabilité incroyables. Leur expression est associée à de multiples conditions pathologiques et peut être utilisée comme biomarqueurs informatifs lors de l'évaluation et de la surveillance de l'état physiopathologique du corps. Cependant, il n'existe pas de consensus sur les miRNA de référence pour la référence exosomale circulante et la normalisation de l'abondance. La présente étude visait à quantifier 16 miRNA de référence potentiels dans dix fluides corporels porcins à l'aide de la qRT-PCR. De plus, leur stabilité a été quantifiée en combinant plusieurs outils statistiques de référence, notamment BestKeeper, GeNorm et NormFinder. Les miRNA identifiés ont été classés de manière exhaustive. Le miRNA le mieux classé a été recommandé comme miRNA de référence optimal pour la normalisation des données. Pour identifier des gènes plus stables, les fluides corporels ont été répartis en trois groupes en fonction du point de collecte, ils sont in vivo (bile, liquide vésical et suc gastrique), in vitro (colostrum, lait ordinaire, sperme et urine) et dans le sang (UVBP, UABP et PBS). Les miRNA exosomal circulants optimaux les plus stables dans les fluides corporels étaient let-7b-5p (miR-93) dans la bile, miR-92a dans le liquide vésical, miR-93 dans le suc gastrique, let-7b-5p dans le colostrum, miR-92a dans le lait ordinaire et l'urine, miR-25 dans le sperme, let-7b-5p dans l'UVBP, miR-25 dans l'UABP et U6 dans le PBS. Dans l'ensemble, miR-93, miR-451 (miR-92a) et miR-25 sont les miRNA de référence authentiques pour la normalisation des données qRT-PCR des fluides corporels in vivo, in vitro et du sang, respectivement. Dans tous les fluides corporels, miR-451 était le plus stable lors de la détermination de l'abondance des miRNA dans les exosomes circulants